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CLV3是一種分泌性的多肽，在加工分泌過(guò)程中被水解為12個(gè)氨基酸組分的活性多肽。科研團(tuán)隊(duì)一直在尋找分子量更小的量子點(diǎn)作為CLV3的熒光標(biāo)簽，為解決這一問(wèn)題，有科研學(xué)者提供了一種CLV3十二肽修飾的CdTe量子點(diǎn)的制備方法，采用該量子點(diǎn)所制備的熒光探針，瑞禧生物小編為大家分享如下：

CLV3十二肽修飾的CdTe量子點(diǎn)的制備方法，包括以下步驟:

(I) 、采用一鍋法合成CdTe量子點(diǎn)；(2)、采用芴甲氧羰基固相肽合成法合成CLV3十二肽，采用反向HPLC進(jìn)行純化，純化后制得純度大于98%的CLV3十二肽，其氨基酸序列為NH2-RTVPSGPDPLHH-C00H ； (3)、采用零距離偶聯(lián)法將CLV3十二肽連接到量子點(diǎn)CdTe的表面，從而制得CLV3十二肽修飾的CdTe量子點(diǎn)。
所述步驟(1)中，CdTe量子點(diǎn)的合成方法具體如下:首先將CdCl2溶液與巰基乙酸混合均勻，并在混合液中持續(xù)通入高純氮?dú)獗３只旌弦好芭轄顟B(tài)；然后采用堿性溶液將混合液的PH調(diào)節(jié)至堿性，直至混合液變澄清后停止調(diào)節(jié)；將檸檬酸三鈉和Na2TeO3溶液添加至混合液中，最后加入NaBH4,混合均勻后得到反應(yīng)液，并停止通入氮?dú)?；將反?yīng)液移置反應(yīng)爸中,在95-105°C的條件下反應(yīng)l-2h ;反應(yīng)結(jié)束后在反應(yīng)液中加入過(guò)量丙酮,生成沉淀,將沉淀離心分離后收集，所得沉淀即為CdTe量子點(diǎn)，最后將沉淀用超純水重懸后放置于冰箱中冷藏。
所述步驟⑵中，采用ABI433A型多肽合成儀進(jìn)行合成，純化時(shí)采用反相HPLC進(jìn)行，反相HPLC包含兩個(gè)溶劑輸送泵，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，多肽純度用220nm紫外吸收值測(cè)定和全離子液相色譜-質(zhì)譜的方法的分析。
所述的零距離偶聯(lián)法的步驟如下:將碳化二亞胺、N-羥基硫代琥珀酰亞胺、2-嗎啉乙磺酸緩沖液以及去離子水加入到CdTe量子點(diǎn)溶液中，攪拌反應(yīng)后制得混合物；將混合物離心除去過(guò)量的試劑，所剩余的沉淀用雙蒸水洗滌后，再向沉淀中加入CLV3十二肽、雙蒸水以及硼酸鈉緩沖液，得到混合溶液；將混合溶液用超聲波在25°C條件下溫育2h，然后將混合溶液在4°C條件下儲(chǔ)存過(guò)夜，混合溶液中過(guò)量的多肽通過(guò)離心的方法除去，即可制得CLV3十二肽修飾的CdTe量子點(diǎn)。

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