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熒光聚苯乙烯微球在生物醫學領域有著廣泛的應用，現有的基于熒光有機染料制備熒光聚苯乙烯微球的方法中，如吸附法和化學鍵合法等，下面瑞禧生物小編給大家分享了一種熒光聚苯乙烯微球的制備方法，一起來看！

(1)將熒光染料與疊氮化合物偶聯結合；
(2)將聚苯乙烯種子微球分散于含有功能單體、引發劑和乳化劑的水溶液中，升溫聚合，得到具有官能團修飾的微球載體；含表面活性劑(乳化劑)能夠使功能單體乳化，從而更好的進入微球，利用功能單體對微球進行修飾一方面是為了使微球表面和內部均富含官能團，另一方面是為了使微球的結構更松散，從而后續溶脹進去更多的熒光染料分子；本發明使用的聚苯乙烯為通過柔性高分子單體與苯乙烯單體共聚制得，高分子鏈一圈一圈纏繞形成球狀(類似于毛線球)，溶脹過程為將其分子鏈打開的過程；該步驟通過在聚苯乙烯微球內部溶脹功能單體，進行聚合重構微球，改善微球與染料的相容性。通過溶脹不同含量的高分子單體聚合成的微球載體，能夠分別制得3.0～5.5μm的單分散微球。
(3)將步驟(1)中偶聯疊氮化合物的熒光染料溶解于有機溶劑中，得到熒光染料溶液，將步驟(2)中微球載體溶解于有機溶劑中，得到微球載體溶液，將熒光染料溶液逐滴加
到微球載體溶液中，得到混合溶液，偶聯疊氮化合物的熒光染料溶脹到微球載體內部；
(4)高溫處理步驟(3)的混合溶液，疊氮化合物熱解產生的中間體磺酰硝烯或卡賓能夠插入微球聚合物的碳氫單鍵中，從而將疊氮化合物共價結合到聚苯乙烯微球上，使熒光染料分子與聚苯乙烯微球形成一個分子結構，得到本發明熒光聚苯乙烯微球。反應中間體插入脂肪族化合物的碳氫單鍵中有利于實現熒光微球的大編碼容量，在結合溶脹法和化學鍵合法的同時，微球表面功能化也通過溶脹聚合完成，熒光編碼微球表面均布豐富的羧基和羥基，表面的羥基可以減少對蛋白質的非特異性吸附。

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