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由于殼聚糖的高分子特性，其水溶性差，只能在酸性水溶液中溶解，葉酸又無法溶于酸性水溶液，所以，采用先將殼聚糖與DMSO中的葉酸偶聯(lián)，后進行熒光標記及采用離子交聯(lián)反應法制備納米粒的方法，用異硫氰酸熒光素標記殼聚糖和葉酸偶聯(lián)殼聚糖。

熒光標記的葉酸殼聚糖納米粒的制備：稱取10 mg異硫氰酸熒光素(FITC),溶于10mL無水乙醇中，在磁力攪拌條件下逐滴加入到20mL葉酸-殼聚糖的醋酸溶液中，避光反應4 h,使FITC上的碳原子與殼聚糖上的氨基反應以便進行標記。用10mol/LNaOH調(diào)節(jié)pH值至9。離心用蒸餾水洗滌，直至濾液澄清呈無色為止。將沉淀重新用2%醋酸溶液溶解，用10 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH值至5，在磁力攪拌條件下逐滴加入10mL TPP溶液(2g/L)。反應20min后得到熒光標記的葉酸-殼聚糖納米粒"1。

采用紅外光譜儀分析葉酸與殼聚糖的偶聯(lián)情況。如上圖所示，葉酸偶聯(lián)殼聚糖的紅外光譜。從葉酸偶聯(lián)殼聚糖的紅外光譜可以看出：NH2在1640 cm處的吸收峰和COOH在1692 cm~處的吸收峰消失，在1562 cm處出現(xiàn)了新的強吸收峰，說明殼聚糖上的氨基與葉酸上的羧基形成了酰胺鍵,兩者成功偶聯(lián)。

熒光標記的葉酸-殼聚糖納米粒的顆粒粒徑比較集中，無顆粒團聚現(xiàn)象,平均粒徑約為290nm。熒光標記的葉酸-殼聚糖納米粒的原子力顯微鏡掃描像。可見:其顆粒形態(tài)規(guī)則，顆粒大小比較均勻，無顆粒團聚現(xiàn)象。此次完善了葉酸修飾殼聚糖納米載體的制備工藝，為后續(xù)靶向性納米制劑的研制提供了技術手段。

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