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產品名稱:Cy5-Vimentin, 花菁素Cy5標記波形蛋白
一、合成方法
1. 合成路線
步驟:
波形蛋白的預處理:
通過重組表達或細胞裂解液提取波形蛋白,確保其天然構象。
Cy5染料的活化:
將Cy5-NH?與琥珀酰亞胺酯(NHS ester)反應,生成活性酯。
標記反應:
活性酯化的Cy5與波形蛋白的氨基反應,形成酰胺鍵。
關鍵點:
反應需在低溫(4℃)和中性pH(pH 7.4)下進行,避免波形蛋白變性。
使用過量Cy5染料(摩爾比10:1)提高標記效率。
2. 純化與表征
純化:
通過凝膠過濾(如Sephadex G-25)去除未反應的Cy5和副產物。
表征:
SDS-PAGE:檢測波形蛋白的分子量是否符合預期。
熒光光譜:驗證Cy5的激發和發射波長是否符合標準。
質譜(MS):確認Cy5與波形蛋白的連接。
溫馨提示:僅用于科研,不能用于人體實驗!wyh
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